2019年12月,中國湖北省武漢市發(fā)生了一系列急性呼吸道疾病,即新型冠狀病毒感染肺炎(novel coronavirus pneumonia,NCP)。這種疾病從武漢迅速傳播到全國各地甚至是其他國家。
日立120kV TEM HT7800
透射電子顯微鏡(TEM)是觀察病毒形態(tài)的最佳工具。日立透射電鏡HT7800有高反差和高分辨兩種模式,能同時兼顧生物組織的大視野觀察和病毒的高分辨觀察。其 Specimen Search (自動顆粒搜索功能)可以自動尋找病毒顆粒,并進行記錄統(tǒng)計。
病毒是一種沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的特殊生物。它們的結(jié)構(gòu)非常簡單,由蛋白質(zhì)外殼和內(nèi)部的遺傳物質(zhì)組成。病毒不能獨立生存,必須生活在其他生物的細(xì)胞內(nèi),一旦離開活細(xì)胞可就不表現(xiàn)任何生命活動跡象。病毒個體極其微小,光學(xué)顯微鏡由于可見光波長的限制,只能看到某些病毒的包涵體,絕大多數(shù)的病毒要在電子顯微鏡下才能看到。透射電鏡觀察病毒有兩種方式,第一種是在超薄切片中觀察被感染細(xì)胞內(nèi)病毒的形狀、大小、排列及其組裝、成熟過程過程的形態(tài)特征;第二種是將病毒進行分離純化,使用磷鎢酸、醋酸鈾等電子致密物對病毒進行負(fù)染,觀察病毒的超微結(jié)構(gòu)。
Vero細(xì)胞內(nèi)的HSV病毒(被感染細(xì)胞的組織切片)
例如,單純皰疹病毒(Herpes Simplex Virus,HSV)是皰疹病毒的典型代表,是一種傳染性極高的病毒,在世界各地都很常見。大多數(shù)人在兒童世界就好感染HSV病毒,但是一般情況下HSV都潛伏在神經(jīng)節(jié)里,人體的免疫系統(tǒng)會一直監(jiān)視著它們。但是在感冒、疲勞、睡眠不足、壓力大、緊張焦慮等因素的影響下,免疫力下降時,潛伏于體內(nèi)的HSV便會大量繁殖,導(dǎo)致口腔、嘴角附近起泡發(fā)病,繼而群集、糜爛、結(jié)痂。這個過程就是我們俗稱的嘴唇起火泡。上圖就是HSV病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制組裝,并穿越細(xì)胞膜的透射電鏡照片。
對病毒的診斷和研究都離不開電子顯微鏡,透射電鏡是確定各種病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)的最有用工具。
埃博拉病毒
SARS病毒
艾滋病病毒
電鏡負(fù)染技術(shù)是一種快速簡便的操作程序,也是病毒性致病因子診斷的常用方法,在新病毒的發(fā)現(xiàn)、尋找對抗新病毒方法的工作中都做出了重要貢獻。而且,在臨床標(biāo)本中病毒粒子數(shù)極少的情況下,電鏡就成為了診斷中最重要的工具。
但是由于病毒的尺寸太小,需要在很高的放大倍數(shù)、視野很小的條件下才能觀察到。在病毒粒子極少時,就要求測試人員在樣品中一個小區(qū)域一個小區(qū)域的逐步辨識,并且在有病毒的區(qū)域進行拍攝。如果要對病毒進行統(tǒng)計,還需要對整個有病毒區(qū)域進行覆蓋拍攝,并將圖片輸入到專業(yè)的圖像處理軟件中進行計算。過程及其枯燥,且耗時。
日立透射電鏡HT7800的Specimen Search功能可以為這一問題提供自動化的解決方案。我們將病毒樣品放進電鏡,輸入目標(biāo)顆粒的尺寸、寬容度等參數(shù),選擇需要搜索的區(qū)域,再進行一些簡單的設(shè)置,電鏡就可以開始自動搜尋并記錄了。
選擇自動搜索區(qū)域
自動搜索時可跳過銅網(wǎng)骨架
這一過程實現(xiàn)了搜索、識別、拍攝、分析的全自動無人值守工作。由于日立電鏡的高穩(wěn)定性,HT7800可以長時間聯(lián)系不間斷的運行,對抗病毒工作提供最穩(wěn)定的支持。
自動運行完成后,我們就可以獲得大量的目標(biāo)顆粒照片和統(tǒng)計結(jié)果的表格。Specimen Search功能使用最先進是識別算法,即使比冠狀病毒小10倍的蛋白顆粒,也可輕松識別:
樣品:負(fù)染鐵蛋白顆粒
蛋白顆粒統(tǒng)計表格
助力新型冠狀病毒研究,天美在行動。
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